CD163 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-429989-ACT

Das murine Cd163-Gen kodiert CD163, einen auf Makrophagen beschränkten Scavenger-Rezeptor der SRCR-Familie, der Hämoglobin–Haptoglobin-Komplexe bindet und deren Endozytose fördert. Dadurch unterstützt er den Hämatabbau und das Eisenrecycling über den HO-1-Signalweg. CD163 ist ein Kennzeichen alternativ aktivierter (M2-ähnlicher) Makrophagen und beteiligt sich an Clearance-Programmen, die die Auflösung von Entzündungen, Zytokinnetzwerke und das Gewebe-Remodeling mitprägen. Seine Expression wird durch entzündliche Signale moduliert und überschneidet sich mit der angeborenen Immunsignalgebung sowie dem phagozytotischen Transport, wodurch Makrophagen-Polarisationszustände beeinflusst werden. Veränderte CD163-Spiegel werden in Mausmodellen häufig herangezogen, um die Beteiligung von Makrophagen an chronischer Entzündung, fibrotischem Umbau, metabolischer Dysfunktion, Infektionen und der Biologie tumorassoziierter Makrophagen einzuordnen.

CD163 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cd163-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD163 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cd163-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cd163-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD163-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cd163-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD163-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD163-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cd163-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.