Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD163: sc-400435-ACT

CD163 code un récepteur éboueur (scavenger) restreint aux macrophages, appartenant à la famille SRCR, qui se lie aux complexes hémoglobine–haptoglobine et en médie l’endocytose, reliant ainsi la détoxification de l’hème à des programmes antioxydants et de gestion du fer. CD163 est enrichi sur les monocytes et les macrophages tissulaires et est associé à une polarisation anti-inflammatoire, modulant des réseaux de signalisation des cytokines tels que les voies dépendantes de l’IL-10 et les réponses aux stimuli de l’immunité innée. En façonnant la clairance de l’hémoglobine extracellulaire et en remodelant le tonus inflammatoire, CD163 influence les états d’activation des macrophages dans les contextes d’infection, d’athérosclérose et de microenvironnements associés aux tumeurs. Une expression altérée de CD163 est fréquemment utilisée comme marqueur d’infiltration macrophagique et de phénotype dans des études portant sur l’inflammation chronique et la dérégulation immunitaire.

CD163 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD163 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD163 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD163 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD163, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD163. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD163 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD163 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD163 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD163 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.