CD16 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400544-NIC

FCGR3A codifica o CD16 (FcγRIIIa), um receptor de baixa afinidade para a porção Fc da IgG que é fortemente expresso em células NK (natural killer), monócitos e macrófagos, onde acopla o reconhecimento de anticorpos às funções efetoras celulares. O CD16 sinaliza por meio das cadeias adaptadoras FcRγ e CD3ζ, que contêm motivos ITAM, para ativar quinases da família Src, as vias SYK/ZAP70, o fluxo de cálcio e, a jusante, programas de MAPK e NF-κB que regulam a desgranulação, a liberação de citocinas e a citotoxicidade celular dependente de anticorpos. A variação genética e a expressão alterada de FCGR3A influenciam o processamento de complexos imunes e os pontos de ajuste inflamatórios, ligando esse eixo à autoimunidade e à desregulação imune. A biologia do CD16 também é central em estudos de ativação imune inata, polarização de células mieloides e respostas mediadas por anticorpos em modelos de oncologia e doenças infecciosas.

CD16 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FCGR3A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FCGR3A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FCGR3A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FCGR3A interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.