CD16 Double Nickase Plasmid (h): sc-400544-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD16 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD16 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD16 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FCGR3A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD16: sc-20052
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD16 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400544-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD16 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400544-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCGR3A kodiert CD16 (FcγRIIIa), einen niederaffinen Rezeptor für das Fc-Fragment von IgG, der vor allem auf natürlichen Killerzellen, Monozyten und Makrophagen stark exprimiert wird und dort die Antikörpererkennung mit zellulären Effektorfunktionen verknüpft. CD16 signalisiert über die Adapterketten FcRγ und CD3ζ, die ITAM-Motive enthalten, und aktiviert dadurch Src-Familien-Kinasen, SYK/ZAP70-Signalwege, Calcium-Fluss sowie nachgeschaltete MAPK- und NF-κB-Programme, die Degranulation, Zytokinfreisetzung und antikörperabhängige zelluläre Zytotoxizität regulieren. Genetische Variationen und eine veränderte Expression von FCGR3A beeinflussen den Umgang mit Immunkomplexen und inflammatorische Grundniveaus und verbinden diese Achse mit Autoimmunität und Immunfehlregulation. Die Biologie von CD16 steht zudem im Zentrum von Studien zur Aktivierung der angeborenen Immunität, zur Polarisation myeloider Zellen und zu antikörpervermittelten Antworten in Modellen der Onkologie und der Infektionskrankheiten.
CD16 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FCGR3A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FCGR3A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FCGR3A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FCGR3A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.