Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC90A (h): sc-406721

Présentation

MCUR1 (également connu sous le nom de CCDC90A) code une protéine de la membrane interne mitochondriale qui favorise l’entrée de calcium dans la mitochondrie en modulant le complexe de l’uniporteur mitochondrial du calcium. En régulant les niveaux de Ca²⁺ matriciel, CCDC90A relie la signalisation calcique à la phosphorylation oxydative, à l’activité enzymatique du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) et à l’homéostasie bioénergétique cellulaire, avec des effets en aval sur les espèces réactives de l’oxygène et les réponses au stress. Une perturbation de la fonction de MCUR1/CCDC90A a été associée à un métabolisme mitochondrial altéré et à une vulnérabilité accrue à la dysfonction mitochondriale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études sur le stress cardiométabolique, la neurobiologie et l’adaptation métabolique des cellules cancéreuses. En tant que nœud de signalisation mitochondrial, il est fréquemment étudié dans des voies reliant la gestion du calcium, la sensibilité à l’apoptose et le contrôle de la qualité mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC90A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MCUR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MCUR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MCUR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CCDC90A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MCUR1 pour l'étude de la signalisation de CCDC90A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MCUR1 essentiels à la fonction de CCDC90A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MCUR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CCDC90A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CCDC90A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MCUR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CCDC90A plasmide HDR (h) et le CCDC90A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MCUR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MCUR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.