CCDC111 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404310

Descripción general

PRIMPOL (también conocido como CCDC111) codifica PrimPol, una primasa–polimerasa que favorece la tolerancia al daño del ADN al reiniciar la síntesis de ADN aguas abajo de las lesiones y ayudar a la reactivación de las horquillas de replicación. Esta actividad contribuye a la estabilidad del genoma durante la fase S y se relaciona con vías implicadas en la respuesta al estrés replicativo, la reparación posreplicativa y el mantenimiento de la integridad del ADN mitocondrial y nuclear. El estrés replicativo desregulado y la deficiente omisión de lesiones se asocian con la acumulación de mutaciones y la inestabilidad cromosómica, lo que convierte a PRIMPOL en un objetivo relevante para estudiar mecanismos que influyen en el mantenimiento del genoma asociado al cáncer. Además, la función de PRIMPOL suele examinarse en el contexto del daño oxidativo, las lesiones inducidas por UV y los eventos de cambio de polimerasa durante la recuperación de horquillas detenidas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CCDC111 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRIMPOL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRIMPOL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRIMPOL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CCDC111.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRIMPOL para la investigación de la señalización de CCDC111, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRIMPOL críticos para la función de CCDC111
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRIMPOL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CCDC111 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CCDC111 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRIMPOL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CCDC111 (h) y el plásmido HDR CCDC111 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRIMPOL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRIMPOL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.