Plasmide CRISPR d'Activation (h) CBX7: sc-402903-ACT

CBX7 (chromobox 7) est une protéine du groupe Polycomb qui agit comme lectrice de la chromatine au sein du PRC1 canonique en reconnaissant H3K27me3 et en contribuant au maintien d’une répression transcriptionnelle stable. Par la régulation épigénétique médiée par Polycomb, CBX7 influence le contrôle du cycle cellulaire, l’engagement de lignée, la sénescence et le maintien à long terme des programmes d’identité cellulaire. Une expression altérée de CBX7 ou une activité dysrégulée de PRC1 a été associée à des réseaux aberrants de silençage génique observés dans de multiples contextes cancéreux ainsi que dans des phénotypes liés au développement et au vieillissement. En tant que régulateur nucléaire de la chromatine, CBX7 est fréquemment étudiée dans des voies impliquées dans la mémoire transcriptionnelle et la compaction de la chromatine.

CBX7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CBX7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CBX7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CBX7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CBX7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CBX7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CBX7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CBX7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CBX7 dans les cellules tumorales présentant une expression de CBX7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.