CBP20 Double Nickase Plasmid (h): sc-404124-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CBP20 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CBP20 Double-Nickase-Plasmid (h) und CBP20 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NCBP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CBP20: sc-137123
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CBP20 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBP20 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCBP2 kodiert CBP20, die kleine Untereinheit des nukleären Cap-Bindungskomplexes, der die 7‑Methylguanosin‑Cap auf neu synthetisierten Transkripten der RNA‑Polymerase II erkennt. Zusammen mit NCBP1/CBP80 koppelt CBP20 die Cap-Erkennung an die kotranskriptionelle RNA‑Prozessierung, einschließlich Prä‑mRNA‑Spleißen, 3′‑End‑Bildung, RNA‑Export über TREX‑abhängige Signalwege sowie Überwachungsmechanismen wie den nonsense‑vermittelten mRNA‑Abbau (NMD). Über diese Funktionen trägt CBP20 zur Koordination von Genexpressionsprogrammen bei, die die Zellzykluskontrolle, Stressantworten und die an den RNA‑Stoffwechsel gekoppelte angeborene Immunsignalgebung beeinflussen. Eine Fehlregulation cap‑abhängiger RNA‑Prozessierung und des RNA‑Exports wird in krankheitsassoziierten transkriptomischen Zuständen häufig beobachtet, wodurch NCBP2 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien der RNA‑Biogenese und des nukleär‑zytoplasmatischen Transports ist.
CBP20 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NCBP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NCBP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NCBP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NCBP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.