CBP20 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404124-ACT

Das humane Gen **NCBP2** kodiert **CBP20**, die kleine Untereinheit des nukleären Cap-Bindungskomplexes, der die **7‑Methylguanosin‑Cap** auf neu entstehenden Transkripten der **RNA‑Polymerase II** erkennt. Durch die Assoziation mit **CBP80** sowie die Interaktion mit Faktoren des **Spleißens**, des **mRNA-Exports** und der **RNA-Überwachung** trägt CBP20 zur Koordination der prä‑mRNA‑Prozessierung, der nukleären Exportkompetenz und von Qualitätskontrollwegen wie dem **nonsense-mediated decay** bei. Die CBP20‑abhängige Cap-Erkennung beeinflusst Genexpressionsprogramme während der Zellzyklusprogression und bei Stressantworten, indem sie die Reifung und Stabilität von Transkripten mitprägt. Eine Fehlregulation cap‑abhängiger RNA‑Prozessierung und des Exports ist häufig mit veränderter Proliferation und Phänotypen der Genomaufrechterhaltung verbunden, wodurch **NCBP2** ein relevantes Ziel für mechanistische Studien des RNA‑Metabolismus in krankheitsassoziierten Kontexten darstellt.

CBP20 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NCBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CBP20 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NCBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NCBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CBP20-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NCBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CBP20-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CBP20-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NCBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.