CBP20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404124-ACT

O gene humano NCBP2 codifica o CBP20, a subunidade menor do complexo nuclear de ligação ao cap, que reconhece o cap 7-metilguanosina em transcritos recém-sintetizados pela RNA polimerase II. Por meio da associação com o CBP80 e da interação com fatores de splicing, exportação de mRNA e vigilância de RNA, o CBP20 ajuda a coordenar o processamento do pré-mRNA, a aquisição de competência para exportação nuclear e vias de controle de qualidade como a degradação mediada por nonsense (NMD). O reconhecimento do cap dependente de CBP20 influencia programas de expressão gênica durante a progressão do ciclo celular e respostas ao estresse, ao moldar a maturação e a estabilidade dos transcritos. A desregulação do processamento e da exportação de RNA dependentes de cap é frequentemente associada a fenótipos de proliferação alterada e manutenção do genoma, tornando o NCBP2 um alvo relevante para estudos mecanísticos do metabolismo de RNA em contextos associados a doenças.

CBP20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NCBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CBP20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NCBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NCBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CBP20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NCBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CBP20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CBP20 em células tumorais com expressão de NCBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.