Plásmido Doble Nickase (m) CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1: sc-419722-NIC

Cnr1 codifica el receptor cannabinoide 1 (CB1/CNR1), un GPCR acoplado a Gi/o que responde a endocannabinoides como la anandamida y el 2-AG para regular la transmisión sináptica y la excitabilidad neuronal. La señalización de CB1 modula la adenilil ciclasa y la actividad de cAMP/PKA, activa las cascadas MAPK/ERK e influye en la función de los canales de Ca²⁺ y K⁺, configurando la liberación de neurotransmisores en múltiples circuitos cerebrales. En el ratón, Cnr1 es clave en el diálogo entre los sistemas neuroinmunitario y metabólico, con efectos posteriores sobre la regulación del apetito, el procesamiento de la recompensa, la respuesta al estrés y el balance energético. La actividad alterada de la vía de CB1 se estudia con frecuencia en modelos de fenotipos neuropsiquiátricos, procesamiento del dolor, susceptibilidad a convulsiones y disfunción metabólica asociada a la obesidad, lo que respalda amplias aplicaciones en investigación mecanística.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cnr1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cnr1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cnr1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cnr1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.