Plásmido CRISPR de Activación (m) CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1: sc-419722-ACT

El gen Cnr1 de ratón codifica el receptor cannabinoide 1 (CB1/CNR1), un GPCR acoplado a Gi/o que responde a endocannabinoides como la anandamida y el 2‑araquidonoilglicerol para regular la transmisión sináptica y la señalización neuroendocrina. La activación de CB1 suele suprimir la adenilil ciclasa y la señalización de AMPc/PKA, modula las vías MAPK/ERK y controla la actividad de canales iónicos para ajustar finamente la liberación de neurotransmisores y la excitabilidad neuronal. En el SNC, CNR1 es fundamental para procesos neuromoduladores como la recompensa, la nocicepción, el apetito, la respuesta al estrés y el aprendizaje y la memoria, con funciones adicionales en la señalización metabólica periférica y relacionada con el sistema inmunitario. La alteración de la señalización de CNR1 se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos, vías relacionadas con el dolor y desregulación metabólica en modelos murinos.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cnr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cnr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cnr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cnr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 en células tumorales con expresión de Cnr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.