caveolin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400569

Descripción general

CAV3 codifica la caveolina-3, un componente estructural de las caveolas enriquecido en músculo que organiza microdominios de membrana y actúa como andamiaje de complejos de señalización en el sarcolema. La caveolina-3 contribuye a la mecano-protección y al tráfico de membrana, y modula vías que incluyen la señalización de GPCR, la señalización del receptor de insulina, la regulación de canales iónicos y la señalización de óxido nítrico, mediante la compartimentalización de receptores y quinasas. En el músculo estriado, favorece la organización de los túbulos T, el acoplamiento excitación–contracción y la estabilidad del complejo de proteínas asociado a la distrofina. La alteración de la función o la expresión de CAV3 se asocia con caveolinopatías que afectan al músculo esquelético y cardíaco, incluidos fenotipos distróficos, miocardiopatía y mecanismos relacionados con arritmias, por lo que es relevante para estudios de señalización de membrana e integridad muscular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO caveolin-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CAV3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CAV3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CAV3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína caveolin-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CAV3 para la investigación de la señalización de caveolin-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CAV3 críticos para la función de caveolin-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CAV3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CAV3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR caveolin-3 (h) y el plásmido HDR caveolin-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CAV3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CAV3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.