Plasmide CRISPR d'Activation (m) caveolin-1: sc-419479-ACT

Le gène murin **Cav1** code la **cavéoline-1**, une protéine d’échafaudage des cavéoles qui organise des microdomaines membranaires et régule l’endocytose, la mécanotransduction et l’homéostasie lipidique. La cavéoline-1 module la signalisation via des voies incluant intégrine/FAK–SRC, MAPK/ERK, PI3K–AKT et eNOS, influençant l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que les réponses vasculaires dépendantes de l’oxyde nitrique. Dans les compartiments immunitaires et stromaux, Cav1 affecte la signalisation des cytokines et le trafic vésiculaire, tandis que dans les tissus adipeux et endothéliaux il contribue à la gestion des lipides et à la fonction de barrière. Une expression dérégulée de la cavéoline-1 ou une dynamique altérée des cavéoles a été associée à des réponses modifiées de fibrose, à des phénotypes métaboliques, à des dysfonctionnements pulmonaires et vasculaires, ainsi qu’à une invasion et une métastase des cellules tumorales dépendantes du contexte, ce qui en fait une cible largement utile pour les études des mécanismes de maladie.

caveolin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cav1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caveolin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cav1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cav1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caveolin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cav1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caveolin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caveolin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cav1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.