CatSper CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403796

Übersicht

CATSPER1 kodiert CatSper, eine spermiumspezifische Untereinheit eines Ionenkanals, die für den Kalziumeinstrom erforderlich ist, der die hyperaktivierte Motilität antreibt und die mit der Kapazitation verbundenen Signalwege unterstützt. Die Aktivität des CatSper-Kanals integriert Veränderungen des Membranpotenzials und der intrazellulären Ca2+-Dynamik, um Schlagmuster der Geißel sowie nachgeschaltete Phosphorylierungsereignisse zu regulieren, die für die Befruchtung essenziell sind. Eine Störung von CATSPER1 steht mit eingeschränkter Spermienfunktion in Zusammenhang und ist mit männlichen Infertilitätsphänotypen assoziiert, was das Gen zu einem zentralen Ziel für mechanistische Studien zur Kontrolle der Spermienmotilität macht. Als Bestandteil eines Kanal-Komplexes aus mehreren Untereinheiten dient CatSper1 zudem als Einstiegspunkt, um Assemblierung, Transport (Trafficking) und Regulation von Spermien-Ionenkanälen zu untersuchen.

Das CatSper CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CATSPER1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CATSPER1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CATSPER1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CatSper-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CATSPER1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CatSper-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CATSPER1-Exone abzielen, die für die CatSper-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CATSPER1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CatSper CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CatSper CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CATSPER1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CatSper HDR-Plasmid (h) und CatSper HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CATSPER1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CATSPER1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.