Plasmide Double Nickase (h) cathepsin S: sc-417407-NIC

CTSS code la cathepsine S, une protéase cystéine lysosomale particulièrement active dans les cellules présentatrices d’antigènes, où elle clive la chaîne invariante (CD74) afin de permettre le chargement des peptides sur le CMH de classe II et d’assurer la surveillance immunitaire. Au-delà du renouvellement des protéines dans le compartiment endolysosomal, la cathepsine S contribue au remodelage de la matrice extracellulaire et module la signalisation inflammatoire via la protéolyse de médiateurs immunitaires. Une expression ou une activité dérégulée de CTSS a été associée à une présentation antigénique altérée, à des microenvironnements inflammatoires chroniques et à des interactions immunitaires liées aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier l’immunorégulation et les voies dépendantes des protéases. CTSS est également étudié dans des contextes de neuroinflammation et de pathologie vasculaire, où une protéolyse aberrante peut influencer l’homéostasie tissulaire.

cathepsin S Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTSS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTSS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTSS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTSS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.