Plasmide Double Nickase (h) cathepsin K: sc-400673-NIC

CTSK code la cathepsine K, une protéase cystéine lysosomale dotée d’une forte activité collagénolytique et élastolytique, qui soutient le renouvellement de la matrice extracellulaire lors de la résorption osseuse médiée par les ostéoclastes. Elle participe à la protéolyse endolysosomale et aux programmes de remodelage associés à la différenciation des ostéoclastes et à des réseaux de signalisation tels que les voies dépendantes de RANK/RANKL. Une activité altérée de CTSK est associée à des phénotypes squelettiques et du tissu conjonctif, et une expression dérégulée a été rapportée dans le stroma associé aux tumeurs ainsi que dans des microenvironnements inflammatoires où la dégradation de la matrice contribue au remodelage tissulaire. CTSK est donc largement utilisée comme marqueur fonctionnel et comme nœud mécanistique dans les études sur la biologie des ostéoclastes, la dynamique de la matrice et la signalisation régulée par les protéases.

cathepsin K Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTSK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTSK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTSK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTSK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.