cathepsin F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405658

Descripción general

CTSF codifica la catepsina F, una proteasa cisteínica lisosomal de la familia de las papaínas que contribuye al recambio proteolítico de sustratos intracelulares y endocitados. La catepsina F participa en la degradación mediada por lisosomas, en el flujo de autofagia–lisosoma y en las vías de procesamiento de antígenos que configuran la homeostasis celular y la señalización inmunitaria. La alteración de la actividad de las proteasas lisosomales puede modificar el control de calidad de las proteínas, la remodelación de orgánulos y el procesamiento de la matriz extracelular mediante efectos secundarios sobre el tráfico endo-lisosomal. CTSF se ha estudiado en el contexto de fenotipos neurodegenerativos e inflamatorios, en los que la disfunción lisosomal y la proteostasis alterada son rasgos mecanísticos clave.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cathepsin F (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CTSF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CTSF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CTSF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cathepsin F.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CTSF para la investigación de la señalización de cathepsin F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CTSF críticos para la función de cathepsin F
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CTSF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cathepsin F CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cathepsin F CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CTSF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cathepsin F (h) y el plásmido HDR cathepsin F (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CTSF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CTSF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.