cathepsin D Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400207-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- cathepsin DO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase cathepsin D (h) e o Plasmídeo Double Nickase cathepsin D (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CTSD. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:cathepsin D Anticorpo (D-7): sc-377299
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
cathepsin D Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400207-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cathepsin D Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400207-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTSD codifica a catepsina D, uma endopeptidase aspártica lisossomal que medeia a proteólise global e seletiva de cargas endocitadas e autofágicas, sustentando a homeostase dos lisossomos e a reciclagem de nutrientes celulares. A catepsina D contribui para a maturação endo-lisossomal, o processamento de antígenos e a degradação de componentes da matriz extracelular após a sua captação, ligando a atividade de CTSD à proteostase, à função do eixo autofagia–lisossomo e às respostas ao stress. A expressão ou o tráfego desregulados de CTSD têm sido associados a alterações da integridade lisossomal, processos neurodegenerativos e remodelação do microambiente associada a tumores, tornando-o relevante para estudos de sobrevivência celular e sinalização inflamatória. Por isso, o CTSD humano é amplamente utilizado como gene modelo para dissecar vias dependentes de lisossomos e fenótipos impulsionados por proteases em células cultivadas.
cathepsin D O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CTSD em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CTSD. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CTSD. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CTSD interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.