casein kinase IIα′ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401148-ACT

CSNK2A2 kodiert die katalytische Untereinheit Alpha′ der Casein-Kinase II, eine konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinase, die zusammen mit regulatorischen Beta-Untereinheiten das CK2-Holoenzym bildet. CK2 phosphoryliert ein breites Spektrum an Substraten, die an Chromatinorganisation, Transkription und RNA-Prozessierung, Zellzyklusprogression sowie DNA-Schadensantworten beteiligt sind, und integriert Signale über Signalwege wie Wnt/β-Catenin, NF-κB, PI3K/AKT und MAPK. Über diese Funktionen auf Netzwerkebene trägt CSNK2A2 zur Regulation von Proliferation, Stressadaptation und Apoptose bei und ist damit relevant für mechanistische Studien der onkogenen Signalübertragung, neuroentwicklungsbezogener Prozesse und der Modulation entzündlicher Signalwege. Eine fehlregulierte CK2-Aktivität und veränderte CSNK2A2-Expression wurden in mehreren Krankheitskontexten mit Tumorbiologie, aberranten Phosphorylierungsprogrammen und einer gestörten zellulären Homöostase in Verbindung gebracht.

casein kinase IIα′ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CSNK2A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

casein kinase IIα′ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CSNK2A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CSNK2A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen casein kinase IIα′-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CSNK2A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von casein kinase IIα′-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des casein kinase IIα′-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CSNK2A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.