Plasmide CRISPR d'Activation (h) casein kinase Iγ1: sc-404681-ACT

CSNK1G1 code la caséine kinase Iγ1, une sérine/thréonine kinase associée aux membranes appartenant à la famille CK1, qui module la signalisation dépendante de la phosphorylation ainsi que le renouvellement des protéines. Les isoformes de CK1 régulent de nombreux processus, notamment le trafic des récepteurs, le rythme circadien et la signalisation en réponse au stress, et elles s’articulent avec des voies telles que Wnt/β-caténine, Hedgehog et les réponses aux dommages de l’ADN via la phosphorylation de composants clés de ces voies. En façonnant la dynamique des signaux de phosphorylation à la membrane et au sein de complexes cytosoliques, CSNK1G1 influence le contrôle du cycle cellulaire, la polarité et les boucles de rétroaction homéostatiques. Une activité CK1 dérégulée a été associée à une altération des signaux prolifératifs et à d’autres phénotypes pertinents pour les maladies, ce qui fait de CSNK1G1 une cible utile pour des études mécanistiques sur le remodelage des voies induit par les kinases.

casein kinase Iγ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSNK1G1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

casein kinase Iγ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSNK1G1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSNK1G1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de casein kinase Iγ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSNK1G1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de casein kinase Iγ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie casein kinase Iγ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CSNK1G1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.