Plasmide CRISPR d'Activation (h) CASC3: sc-411606-ACT

CASC3 (également connu sous le nom de MLN51) code un composant central du complexe de jonction des exons (EJC), déposé sur l’ARNm après l’épissage, et coordonne la régulation génique post‑transcriptionnelle. Grâce à des interactions avec des facteurs tels qu’EIF4A3, MAGOH et RBM8A, CASC3 contribue à la surveillance des ARNm et à la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD), influençant la stabilité des transcrits, leur export et leur traduction. Ces fonctions situent CASC3 au sein de voies qui contrôlent le contrôle qualité des ARN et l’homéostasie du protéome, avec des effets en aval sur des programmes d’état cellulaire, notamment la prolifération et la différenciation. La dérégulation de l’activité du complexe de jonction des exons et de la dégradation des ARNm a été associée à des signatures d’expression génique aberrantes observées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye l’utilisation de CASC3 comme nœud mécanistique pour des études de biologie de l’ARN.

CASC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CASC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CASC3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CASC3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CASC3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.