Plasmide Double Nickase (h) CARD 11: sc-402770-NIC

Le gène humain **CARD11 (CARD11/CARMA1)** code une protéine échafaudage qui relie la signalisation des récepteurs antigéniques à l’activation en aval des voies **NF-κB**, **JNK** et **mTOR**, en intégrant les signaux nécessaires à l’activation, à la prolifération des lymphocytes et à la production de cytokines. Après stimulation, CARD11 participe à l’assemblage du complexe **CBM (CARD11–BCL10–MALT1)** afin de favoriser l’activation d’IKK et des programmes transcriptionnels qui contrôlent les réponses immunitaires. Une signalisation CARD11 dérégulée est associée à une altération de l’homéostasie immunitaire, incluant des phénotypes d’immunodéficience et de lymphoprolifération, et des perturbations récurrentes de cette voie sont observées dans certaines hémopathies malignes des cellules B et T. En tant que nœud central de la signalisation proximale aux récepteurs, CARD11 est largement étudié pour les mécanismes de transduction du signal, de régulation transcriptionnelle et de détermination du destin des cellules immunitaires.

CARD 11 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CARD11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CARD11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CARD11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CARD11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.