Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CAR Double Nickase Plasmid (h): sc-418548-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CAR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CAR Double-Nickase-Plasmid (h) und CAR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CXADR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CAR: sc-373791
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CAR Double Nickase Plasmid (h) | sc-418548-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CAR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418548-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CXADR kodiert den Coxsackievirus- und Adenovirus-Rezeptor (CAR), ein Transmembranprotein der Immunglobulin-Superfamilie, das an epithelialen Tight Junctions lokalisiert und zur Zell-Zell-Adhäsion sowie zur Organisation der Barriere beiträgt. CAR ist an der Bildung von Zellkontakten und an der Kopplung an das Zytoskelett beteiligt, unter anderem über Interaktionen mit Gerüstproteinen wie MAGI und PDZ-Domänen-haltigen Partnern, und beeinflusst dadurch die epitheliale Polarität und die Gewebearchitektur. Eine veränderte CXADR-Expression und CAR-Lokalisation wurde mit Änderungen der epithelialen Integrität und von Signalprogrammen in Zusammenhang gebracht, die für die Krebsbiologie, das myokardiale Remodeling und die Anfälligkeit für virales Eindringen relevant sind, was CAR als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Wirt-Pathogen-Interaktion und Kontaktstellenbiologie unterstützt.
CAR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CXADR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CXADR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CXADR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CXADR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.