Plásmido CRISPR de Activación (h) CapZ-α1: sc-405348-ACT

CAPZA1 codifica CapZ-α1, una proteína de “capping” del extremo barbado de los filamentos de actina que se asocia con subunidades β para regular la dinámica de polimerización de la actina, la estabilidad de los filamentos y la remodelación del citoesqueleto. Al controlar el ensamblaje de actina en el borde de avance y en las fibras de estrés, CapZ-α1 influye en la forma celular, la adhesión y la motilidad, integrándose con vías que gobiernan el recambio de las adhesiones focales y la mecanotransducción. La actividad de CAPZA1 también se vincula con la organización sarcomérica y contráctil de la actina, lo que respalda estudios de la arquitectura del citoesqueleto en estados celulares diferenciados y proliferativos. La desregulación del “capping” y la remodelación de la actina se asocia con frecuencia a fenotipos relevantes para la invasión oncogénica, la integridad estructural de los cardiomiocitos y otros trastornos en los que la alteración de la mecánica del citoesqueleto contribuye a la patología.

CapZ-α1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAPZA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CapZ-α1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAPZA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAPZA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CapZ-α1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAPZA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CapZ-α1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CapZ-α1 en células tumorales con expresión de CAPZA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.