Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cappuccino (h): sc-407008

Présentation

Le gène humain BLOC1S4 code la protéine cappuccino, un composant essentiel du complexe 1 de biogenèse des organites apparentés aux lysosomes (BLOC‑1), qui coordonne le trafic membranaire endosomal et le tri des cargos nécessaires à la maturation d’organites spécialisés. La fonction de BLOC‑1 soutient le bourgeonnement des vésicules, leur recyclage et l’acheminement de cargos protéiques à travers le système endosome–lysosome, influençant des processus tels que la biogenèse des granules pigmentaires et les voies de sécrétion dans des cellules spécialisées. La perturbation des sous-unités de BLOC‑1 dérègle le transport intracellulaire et la dynamique vésiculaire, ce qui est pertinent pour des troubles impliquant des organites apparentés aux lysosomes ainsi que pour des phénotypes neurodéveloppementaux et synaptiques plus larges liés à un dysfonctionnement du trafic endosomal. Ainsi, BLOC1S4 est couramment étudié dans le contexte du tri endosomal, de la biogenèse des organites et des conséquences, au niveau des voies cellulaires, d’altérations du trafic membranaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cappuccino (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BLOC1S4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BLOC1S4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BLOC1S4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cappuccino.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BLOC1S4 pour l'étude de la signalisation de Cappuccino, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BLOC1S4 essentiels à la fonction de Cappuccino
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BLOC1S4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cappuccino plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cappuccino plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BLOC1S4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cappuccino plasmide HDR (h) et le Cappuccino (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BLOC1S4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BLOC1S4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.