Plásmido CRISPR de Activación (h) CaM II: sc-400952-ACT

El gen humano **CALM2** codifica la **calmodulina (CaM II)**, un sensor ubicuo de **Ca2+** que convierte los transitorios intracelulares de calcio en señales reguladoras mediante su unión y modulación de numerosas enzimas, canales iónicos y reguladores de la transcripción. A través de la señalización dependiente de Ca2+/calmodulina, contribuye a procesos como el acoplamiento excitación–contracción, la plasticidad sináptica, el control del ciclo celular y la expresión génica dependiente de estímulos, intersectando con vías como la señalización de CaMK, la activación de calcineurina/NFAT y la dinámica de Ca2+ iniciada por GPCR. El amortiguamiento y la decodificación de señales de Ca2+ mediadas por CALM2 sustentan la función mitocondrial y la excitabilidad de membrana, dando forma a redes de fosforilación aguas abajo y a la homeostasis del calcio. La desregulación de la señalización de calmodulina y variantes patógenas de CALM2 se han vinculado con fenotipos arritmogénicos y una disfunción neurocardíaca más amplia, lo que convierte a CALM2 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la biología de enfermedades impulsadas por el calcio.

CaM II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CALM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CaM II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CALM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CALM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CaM II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CALM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CaM II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CaM II en células tumorales con expresión de CALM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.