calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403375

Übersicht

CASQ1 kodiert Calsequestrin 1, ein Ca²⁺-bindendes Protein mit hoher Kapazität, das im Lumen des sarkoplasmatischen Retikulums der Skelettmuskulatur lokalisiert ist. Dort puffert es Ca²⁺ und trägt zur Ausgestaltung der Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung bei. Durch die Interaktion mit Ryanodinrezeptor‑Komplexen und Komponenten des junctionalen SR unterstützt CASQ1 die Dynamik der Ca²⁺‑Freisetzung und ‑Wiederaufnahme, die Kontraktilität, Ermüdungsresistenz und die Homöostase der Muskelfasern bestimmen. Störungen der CASQ1‑abhängigen Ca²⁺‑Handhabung werden mit veränderter intrazellulärer Ca²⁺‑Signalgebung, oxidativen Stressantworten und einem Umbau der SR‑Architektur in Verbindung gebracht. Genetische und funktionelle Studien haben CASQ1 mit einer erhöhten Anfälligkeit für malignen‑Hyperthermie‑ähnliche Phänotypen sowie andere Erkrankungen der Skelettmuskulatur in Zusammenhang gebracht, die durch beeinträchtigte Ca²⁺‑Speicherung und eine fehlregulierte Ca²⁺‑Freisetzung gekennzeichnet sind.

Das calsequestrin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CASQ1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CASQ1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CASQ1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die calsequestrin 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CASQ1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der calsequestrin 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CASQ1-Exone abzielen, die für die calsequestrin 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CASQ1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom calsequestrin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom calsequestrin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CASQ1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das calsequestrin 1 HDR-Plasmid (h) und calsequestrin 1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CASQ1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CASQ1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.