Plásmido Doble Nickase (h) Calretinin: sc-401389-NIC

El gen humano **CALB2** codifica la **calretinina**, una proteína fijadora de calcio con dominios tipo EF-hand que amortigua el Ca2+ intracelular y modula la excitabilidad dependiente del calcio, la transmisión sináptica y la regulación génica dependiente de la actividad. La calretinina está enriquecida en poblaciones específicas de interneuronas y también se expresa en determinados tejidos periféricos, donde contribuye a la dinámica del citoesqueleto y al tráfico vesicular mediante señalización regulada por Ca2+. **CALB2** se utiliza comúnmente como marcador molecular de la identidad de subtipos neuronales y de la diferenciación mesotelial, vinculando su expresión con estudios sobre la organización de circuitos neuronales y programas de linaje epitelial. La desregulación de la expresión de **CALB2** y las alteraciones de la homeostasis del calcio se han asociado con contextos de neurodesarrollo y neurodegeneración, así como con la biología tumoral en ciertos tipos de tejido, lo que respalda su utilidad para la investigación mecanística.

Calretinin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CALB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CALB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CALB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CALB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.