Plasmide Double Nickase (h) Calponin 3: sc-402465-NIC

CNN3 code la calponine 3, une protéine régulatrice se liant à l’actine, qui module l’architecture du cytosquelette, la contractilité actomyosine et les changements de forme cellulaire importants pour l’adhésion et la motilité. La calponine 3 participe à des réseaux de signalisation qui couplent la dynamique de l’actine à des processus tels que l’organisation des fibres de stress, la mécanotransduction et des programmes de différenciation dans des cellules mésenchymateuses et de type muscle lisse. Une expression altérée de CNN3 ou une localisation anormale de la calponine 3 a été associée, dans des modèles de cancer, à une migration et une invasivité dérégulées, ainsi qu’à des phénotypes liés au remodelage de la matrice extracellulaire. Ces fonctions font de CNN3 une cible pertinente pour étudier les voies dépendantes de l’actine sous-jacentes à la morphogenèse tissulaire, à des comportements de type réparation des plaies et à la plasticité cellulaire associée aux maladies.

Calponin 3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CNN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CNN3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CNN3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CNN3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.