Plásmido Doble Nickase (h) Calponin 3: sc-402465-NIC

CNN3 codifica la calponina 3, una proteína reguladora que se une a la actina y modula la arquitectura del citoesqueleto, la contractilidad actomiosínica y los cambios en la forma celular importantes para la adhesión y la motilidad. La calponina 3 participa en redes de señalización que vinculan la dinámica de la actina con procesos como la organización de las fibras de estrés, la mecanotransducción y programas de diferenciación en células mesenquimales y de tipo músculo liso. La alteración de la expresión de CNN3 o de la localización de la calponina 3 se ha asociado con migración e invasividad desreguladas en modelos de cáncer y con fenotipos relacionados con la remodelación de la matriz extracelular. Estas funciones hacen de CNN3 una diana relevante para estudiar vías dependientes de actina que subyacen a la morfogénesis tisular, comportamientos tipo reparación de heridas y la plasticidad celular asociada a enfermedades.

Calponin 3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CNN3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CNN3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CNN3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CNN3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.