Plasmide Double Nickase (h) Calponin 1: sc-401397-NIC

CNN1 code la calponine 1, une protéine se liant à l’actine et à la calmoduline, enrichie dans le muscle lisse différencié, où elle stabilise le cytosquelette contractile et module l’activité ATPase de l’actomyosine. La calponine 1 contribue à l’organisation des filaments d’actine, à la dynamique des adhésions focales et à la régulation, dépendante du calcium, du tonus du muscle lisse, reliant le remodelage du cytosquelette à la signalisation contractile. Une expression altérée de CNN1 est fréquemment utilisée comme indicateur du changement de phénotype des cellules musculaires lisses lors du remodelage vasculaire et des processus associés à la fibrose. Ces propriétés font de CNN1 un nœud moléculaire utile pour étudier la régulation du cytosquelette, la motilité cellulaire et la différenciation du muscle lisse dans des contextes cardiovasculaires et de remodelage tissulaire.

Calponin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CNN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CNN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CNN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CNN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.