Plásmido CRISPR de Activación (h) Calpain reg: sc-403478-ACT

CAPNS1 codifica la pequeña subunidad reguladora esencial para la estabilidad y la actividad de las proteasas ubicuas calpaína-1 y calpaína-2, lo que permite una proteólisis limitada y dependiente de calcio de proteínas estructurales y de señalización. Mediante el clivaje controlado de sustratos, la actividad de calpaínas sustentada por CAPNS1 modula la remodelación del citoesqueleto, el recambio de adhesiones focales, la migración celular y la progresión del ciclo celular, y se integra con programas de proteostasis y respuesta al estrés. La señalización de calpaínas también influye en las vías inflamatorias y apoptóticas al reconfigurar reguladores clave, vinculando la función de CAPNS1 con procesos relevantes para la biología tumoral, la neurodegeneración y modelos de lesión tisular. La expresión alterada de CAPNS1 o la desregulación de las calpaínas se ha asociado con cambios en la capacidad invasiva celular, la integridad de las barreras y la susceptibilidad al estrés proteotóxico, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos.

Calpain reg El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAPNS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Calpain reg El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAPNS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAPNS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Calpain reg. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAPNS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Calpain reg en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Calpain reg en células tumorales con expresión de CAPNS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.