Plasmide CRISPR d'Activation (m) Calpain 10: sc-423852-ACT

Capn10 code la calpaïne 10, une protéase à cystéine dépendante du calcium, non lysosomale, qui module une protéolyse limitée de substrats intracellulaires afin de réguler le renouvellement des protéines, le remodelage du cytosquelette et la transduction du signal. Dans les cellules de souris, l’activité de la calpaïne 10 a été associée à la fonction mitochondriale, aux réponses au stress oxydant et à l’homéostasie métabolique, en influençant des voies qui coordonnent la signalisation de l’insuline et l’utilisation du glucose. Une expression ou une activité dérégulée de CAPN10 a été liée à des phénotypes métaboliques, notamment une sensibilité à l’insuline et un équilibre énergétique modifiés, ce qui étaye sa pertinence dans l’étude des mécanismes liés au diabète. En tant que protéase capable de remodeler des réseaux de signalisation via des clivages ciblés, la calpaïne 10 est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la biologie des adipocytes, le métabolisme du muscle squelettique et le remodelage induit par le stress.

Calpain 10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Capn10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calpain 10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Capn10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Capn10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calpain 10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Capn10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calpain 10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calpain 10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Capn10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.