Calgizzarin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404169-ACT

S100A11 kodiert Calgizzarin, ein kalziumbindendes Protein der S100-Familie, das mit Phospholipiden und zytoskelettalen Elementen interagiert, um Membrandynamik, Zellbeweglichkeit und stressadaptive Signalübertragung zu regulieren. Calgizzarin ist an Ca2+-abhängigen Prozessen beteiligt, darunter Aktin-Remodeling, Vesikeltransport und die Koordination des Zellzyklus, und wird häufig im Kontext epithelialer Plastizität und entzündlicher Mikroumgebungen untersucht. Eine veränderte S100A11-Expression wurde in mehreren Krebs- und Fibrosemodellen mit dysregulierter Proliferation, invasionsassoziierten Phänotypen und Apoptoseresistenz in Verbindung gebracht. Als schaltstellenartiger Kalziumsensor bietet Calgizzarin einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie Kalziumsignalgebung mit der Organisation des Zytoskeletts und transkriptionellen Programmen zusammenwirkt.

Calgizzarin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100A11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Calgizzarin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100A11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100A11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Calgizzarin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100A11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Calgizzarin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Calgizzarin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100A11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.