Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) CAD: sc-403028-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CAD consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CAD (h) y el plásmido de doble nickasa CAD (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DFFB. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CAD Anticuerpo (F-11): sc-374067
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CAD | sc-403028-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CAD | sc-403028-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DFFB codifica CAD (DNasa activada por caspasas), la endonucleasa responsable de la fragmentación internucleosomal del ADN durante la apoptosis. En células sanas, la actividad de CAD se mantiene reprimida por su inhibidor ICAD (DFFA) hasta que la escisión de ICAD dependiente de caspasas libera a CAD para cortar la cromatina, conectando la señalización apoptótica con el desmantelamiento nuclear. Este proceso se cruza con las vías de la cascada de caspasas, la organización de la cromatina y la eliminación de células moribundas, y se utiliza comúnmente como lectura molecular de la muerte celular programada. La regulación alterada de la fragmentación del ADN mediada por CAD se ha asociado con fenotipos apoptóticos aberrantes y defectos en la integridad del genoma, lo que respalda su relevancia en estudios de biología del cáncer, homeostasis inmunitaria y neurodegeneración.
CAD El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DFFB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DFFB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DFFB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DFFB alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.