CAD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403028

Übersicht

DFFB kodiert die durch Caspasen aktivierte DNase (CAD), die Endonuklease, die während der Apoptose für die internukleosomale DNA-Fragmentierung verantwortlich ist. In lebensfähigen Zellen wird CAD durch Bindung an seinen Inhibitor und sein Chaperon ICAD (DFFA) inaktiv gehalten und nach einer caspase-3-abhängigen Spaltung von ICAD aktiviert, wodurch der Chromatinabbau und der apoptotische Zerfall des Zellkerns ermöglicht werden. Diese Nukleaseaktivität verknüpft die intrinsischen und extrinsischen Apoptosewege mit der Kontrolle der Genomintegrität, indem sie eine geordnete Entsorgung der DNA während des programmierten Zelltods sicherstellt. Eine Fehlregulation der CAD/ICAD-Funktion kann die Ausführung der Apoptose stören und wurde in Zusammenhängen wie onkogener Transformation, Homöostase von Immunzellen und Gewebedegeneration untersucht, bei denen veränderte Zelltodprogramme eine Rolle spielen.

Das CAD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DFFB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DFFB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DFFB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CAD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DFFB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CAD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DFFB-Exone abzielen, die für die CAD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DFFB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CAD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CAD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DFFB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CAD HDR-Plasmid (h) und CAD HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DFFB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DFFB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.