Plasmide Double Nickase (h) CA XII: sc-404149-NIC

L’anhydrase carbonique XII (CA XII), codée par le gène humain CA12, est une métalloenzyme transmembranaire au zinc qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ en bicarbonate et en protons, contribuant à la régulation du pH extracellulaire et péricellulaire. En couplant l’apport en bicarbonate et la gestion des protons aux processus de transport membranaire, CA XII participe à l’homéostasie acido-basique cellulaire, au transport ionique épithélial et à l’adaptation métabolique lorsque les conditions d’oxygène et de nutriments varient. L’expression de CA12 est fréquemment dérégulée dans des microenvironnements hypoxiques et soumis à un stress métabolique, où une régulation altérée du pH peut influencer l’adhésion, la migration et la signalisation cellulaires. Ces caractéristiques font de CA XII une cible utile pour étudier les voies dépendantes du pH et les modifications de la physiologie tissulaire associées aux maladies.

CA XII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CA12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CA12. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CA12. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CA12.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.