CA XII CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404149-ACT

Das humane Gen **CA12** kodiert die Carboanhydrase XII (CA XII), ein membranassoziiertes Zink-Metalloenzym, das die reversible Hydratisierung von CO₂ zu Bicarbonat und Protonen katalysiert und so zur Regulation des extrazellulären und perizellulären pH-Werts beiträgt. Durch die Steuerung der Bicarbonatverfügbarkeit und des Protonenflusses beeinflusst CA XII den Ionentransport, die Dynamik der Zelladhäsion sowie die metabolische Anpassung in hypoxischen oder sauren Mikroumgebungen. Die Aktivität von CA XII greift in pH-abhängige Signalwege und Transporternetzwerke ein, darunter Bicarbonattransporter und protonengekoppelte Prozesse, die Redoxgleichgewicht und glykolytische Physiologie mitprägen. Veränderte **CA12**-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, in denen eine gestörte pH-Homöostase und eine Azidifizierung der Mikroumgebung zu zellulären Stressantworten und phänotypischer Plastizität beitragen.

CA XII Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CA12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CA XII Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CA12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CA12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CA XII-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CA12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CA XII-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CA XII-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CA12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.