Plásmido CRISPR de Activación (h) CA IX: sc-400905-ACT

El gen humano CA9 codifica la anhidrasa carbónica IX (CA IX), una enzima asociada a la membrana e inducible por hipoxia que cataliza la hidratación reversible del CO₂ para regular la acidificación extracelular y la homeostasis del pH intracelular. CA IX favorece la adaptación celular al estrés por baja disponibilidad de oxígeno y se integra con la señalización de HIF-1, las redes de transporte iónico y la reprogramación metabólica que influyen en la supervivencia celular, la migración y el tamponamiento del microambiente. La expresión desregulada de CA9 se estudia con frecuencia como marcador de nichos hipóxicos y acidificados, y se asocia con alteraciones del equilibrio redox y con fenotipos vinculados a la invasión en modelos de enfermedad de tejido sólido. Estas propiedades hacen de CA IX un nodo útil para investigar la señalización dependiente del pH, los programas transcripcionales sensibles a la hipoxia y las presiones de selección impulsadas por el microambiente.

CA IX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CA9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CA IX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CA9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CA9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CA IX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CA9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CA IX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CA IX en células tumorales con expresión de CA9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.