C9orf169 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406346

Übersicht

CYSRT1 (auch als C9orf169 annotiert) kodiert ein kleines Protein mit sich abzeichnenden Funktionen in Programmen der epithelialen Differenzierung und in der Barrierebiologie; eine Anreicherung wurde insbesondere in verhornten Geweben wie dem oberen Aerodigestivtrakt beschrieben. Obwohl der molekulare Mechanismus noch nicht vollständig geklärt ist, deuten Expressionsmuster sowie eine Koregulation mit Genen der cornified envelope und der Keratinisierung auf eine Beteiligung an der terminalen Differenzierung, an zellulären Stressantworten und an der Aufrechterhaltung der epithelialen Homöostase hin. Eine fehlregulierte Expression von CYSRT1/C9orf169 wurde in mehreren transkriptomischen Studien zu Plattenepithelien beobachtet, was seine Nutzung als Marker und als funktioneller Knotenpunkt in Signalwegen unterstützt, die mit dem Gleichgewicht zwischen Proliferation und Differenzierung verknüpft sind. Diese Eigenschaften machen CYSRT1/C9orf169 relevant für die Untersuchung epithelialer Biologie, inflammatorischer Mikroumgebungen und kontextabhängiger Veränderungen im Zusammenhang mit der Transformation zu Plattenepithelkarzinomen.

Das C9orf169 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYSRT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYSRT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYSRT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C9orf169-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYSRT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C9orf169-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYSRT1-Exone abzielen, die für die C9orf169-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYSRT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C9orf169 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C9orf169 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYSRT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C9orf169 HDR-Plasmid (h) und C9orf169 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYSRT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYSRT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.