Plásmido CRISPR de Activación (h) C6orf141: sc-418416-ACT

C6orf141 (humano) codifica una proteína poco caracterizada y con una anotación funcional limitada, y la evidencia actual sugiere que podría contribuir a programas reguladores específicos de tipo celular más que a una vía metabólica central. Conjuntos de datos transcriptómicos indican una expresión variable entre tejidos y contextos del desarrollo, lo que respalda investigar posibles funciones en el control transcripcional, la diferenciación celular o procesos adaptativos al estrés. Dado que los datos mecanísticos siguen siendo escasos, C6orf141 se estudia con frecuencia como un marco de lectura abierto no caracterizado para cartografiar redes de interacción proteica, la localización subcelular y firmas génicas aguas abajo. Los patrones de expresión alterados observados en ciertos estudios ómicos de enfermedad motivan la investigación de posibles asociaciones con estados de expresión génica desregulados, evitando asumir causalidad.

C6orf141 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C6orf141 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C6orf141 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C6orf141 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C6orf141, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C6orf141. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C6orf141 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C6orf141 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C6orf141 en células tumorales con expresión de C6orf141 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.