C1q-C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403618-ACT

C1QC kodiert die C‑Kette der Komplementkomponente C1q, eines initiierenden Erkennungsmoleküls des klassischen Komplementwegs, das Immunkomplexe und veränderte körpereigene Strukturen bindet und dadurch nachgeschaltete Komplementaktivierung auslöst. Über die Komplementproteolyse hinaus beeinflusst C1q die phagozytische Clearance, die Beseitigung apoptotischer Zellen und inflammatorische Signalwege durch Interaktionen mit Zelloberflächenrezeptoren auf myeloiden und geweberesidenten Immunzellen. Die Biologie von C1q ist eng mit der angeborenen Immunüberwachung und der Gewebehomöostase verknüpft, und eine fehlregulierte Komplementaktivität wurde mit chronischer Entzündung und autoimmunähnlichen Phänotypen in Verbindung gebracht. Eine veränderte C1QC-Expression wird außerdem als Marker für spezifische Makrophagen-/Mikroglia-Zustände verwendet, die für Neuroinflammation sowie fibrotische oder tumorassoziierte Immunmikroumgebungen relevant sind.

C1q-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C1QC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C1q-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C1QC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C1QC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C1q-C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C1QC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C1q-C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C1q-C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C1QC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.