Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1orf173: sc-409362-ACT

ERICH3 (également appelé C1orf173) code une protéine riche en glutamate dont la fonction est peu annotée, ce qui en fait une cible intéressante pour des études mécanistiques portant sur des gènes humains encore mal caractérisés. Les données disponibles issues de profils d’expression et d’études d’association génétique suggèrent qu’ERICH3 pourrait influencer des programmes de régulation cellulaire liés à la biologie neuronale et à la transcription induite par le stress, avec une possible convergence vers des voies contrôlant l’homéostasie de l’expression génique et la protéostase. En tant que cadre de lecture ouvert (ORF) largement non caractérisé, ERICH3 est souvent étudié pour relier le génotype au phénotype dans des analyses à l’échelle des systèmes. Des profils d’expression dérégulés ont été rapportés dans des jeux de données pertinents pour des maladies, ce qui soutient son utilisation en recherche exploratoire sur les corrélats moléculaires de traits complexes.

C1orf173 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ERICH3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1orf173 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ERICH3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ERICH3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1orf173. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ERICH3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1orf173 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1orf173 dans les cellules tumorales présentant une expression de ERICH3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.