Plasmide CRISPR d'Activation (h) C19orf66: sc-408037-ACT

C19orf66 code une protéine induite par l’interféron (également appelée shiftless, SHFL) qui limite la réplication d’une grande diversité de virus en modulant la traduction des ARN viraux et en modifiant l’accumulation de protéines virales. Elle participe à la signalisation immunitaire innée en aval de l’interféron de type I et contribue à des programmes effecteurs antiviraux qui remodèlent le métabolisme de l’ARN et la synthèse protéique dans les cellules infectées. C19orf66 a été associée à des voies contrôlant la stabilité des ARN et la régulation de la traduction, et son activité recoupe des réponses de stress cellulaires qui influencent les interactions hôte–pathogène. La dérégulation des réseaux de gènes stimulés par l’interféron, dont C19orf66, est pertinente pour les études portant sur l’inflammation chronique, la susceptibilité virale et les phénotypes de maladies associées à l’immunité.

C19orf66 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C19orf66 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C19orf66 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C19orf66 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C19orf66, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C19orf66. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C19orf66 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C19orf66 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C19orf66 dans les cellules tumorales présentant une expression de C19orf66 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.