c-Myb Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421766

Descripción general

Myb codifica el factor de transcripción c-Myb, un regulador nuclear de unión al ADN que controla programas de expresión génica necesarios para la proliferación, la supervivencia y el compromiso de linaje en compartimentos hematopoyéticos y en otros compartimentos de progenitores. c-Myb modula la progresión del ciclo celular y la diferenciación coordinando redes transcripcionales con cofactores y reguladores de la cromatina, e integrando señales que influyen en la autorrenovación y la maduración. La actividad desregulada de MYB se ha vinculado con una hematopoyesis alterada y con estados transcripcionales oncogénicos en múltiples neoplasias malignas, lo que lo convierte en un objetivo frecuente para estudios mecanísticos de transformación y de bloqueo de la diferenciación. En modelos murinos, la perturbación de Myb se utiliza ampliamente para analizar la temporización del desarrollo, el mantenimiento de células madre/progenitoras y los circuitos transcripcionales que sustentan fenotipos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO c-Myb (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Myb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Myb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Myb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína c-Myb.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Myb para la investigación de la señalización de c-Myb, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Myb críticos para la función de c-Myb
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Myb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido c-Myb CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido c-Myb CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Myb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR c-Myb (m) y el plásmido HDR c-Myb (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Myb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Myb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.