Plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Mpl (h): sc-403035

Présentation

MPL code pour le récepteur de la thrombopoïétine c‑Mpl, un récepteur de cytokine de type I exprimé principalement dans les cellules souches/progénitrices hématopoïétiques et la lignée mégacaryocytaire, où il régule l’auto-renouvellement, la survie et la production plaquettaire. La liaison du ligand active une signalisation dépendante de JAK2, avec en aval les voies STAT, PI3K/AKT et MAPK/ERK, qui coordonnent les programmes de prolifération et de différenciation dans la niche médullaire. Une signalisation MPL dérégulée et une fonction récepteur altérée sont associées à une mégacaryopoïèse anormale et à la biologie des maladies myéloïdes, notamment à des phénotypes liés à une réponse aberrante aux cytokines et à l’homéostasie des cellules souches. En tant que récepteur restreint à une lignée et doté de sorties de voie bien caractérisées, c‑Mpl constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer la signalisation des cytokines, les décisions de destinée hématopoïétique et le contrôle par rétroaction médié par les récepteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Mpl (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MPL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MPL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MPL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine c-Mpl.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MPL pour l'étude de la signalisation de c-Mpl, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MPL essentiels à la fonction de c-Mpl
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MPL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le c-Mpl plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le c-Mpl plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MPL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le c-Mpl plasmide HDR (h) et le c-Mpl (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MPL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MPL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.