BVES CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403698-ACT

BVES (blood vessel epicardial substance), auch bekannt als POPDC1, kodiert ein membranassoziiertes Protein, das in Herz- und Epithelgeweben angereichert ist und als cAMP-bindender Regulator der Zell-Zell-Adhäsion und des Membrantransports fungiert. BVES ist an der Organisation von Zellkontakten und am Remodeling des Zytoskeletts beteiligt und beeinflusst dadurch die Integrität des Epithels, die Zellmigration sowie Phänotypen der elektrischen Erregungsleitung in quergestreifter Muskulatur. Durch die Modulation cAMP-abhängiger Signalwege und zugehöriger Scaffold-Interaktionen trägt BVES zur Gewebehomöostase und zu Stressantworten bei. Eine veränderte BVES-Expression oder -Lokalisierung wurde mit Defekten der epithelialen Barrierefunktion und mit phänotypischen Veränderungen im Zusammenhang mit der kardialen Erregungsleitung in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zu Kardiomyopathie- und epithelialen Dysregulations-assoziierten Signalwegen unterstreicht.

BVES Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BVES-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BVES Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BVES-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BVES-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BVES-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BVES-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BVES-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BVES-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BVES-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.