Plasmide CRISPR d'Activation (m) BTN2A2: sc-433634-ACT

Le gène murin *Btn2a2* code BTN2A2, une protéine de surface immunorégulatrice de la famille des butyrophilines qui module l’activation des lymphocytes T et la tolérance périphérique via une signalisation dépendante du contact avec les cellules présentatrices d’antigène. L’activité de BTN2A2 influence la fonction de la synapse immunologique, la production de cytokines et la prolifération lymphocytaire, ce qui la relie à des voies qui façonnent les réponses immunitaires adaptatives dans les tissus lymphoïdes. Des altérations de l’expression de BTN2A2 ont été étudiées dans des contextes d’inflammation chronique et de phénotypes de type auto-immun, où des changements de la signalisation co‑régulatrice peuvent affecter l’équilibre entre lymphocytes T effecteurs et régulateurs. En tant que molécule associée aux points de contrôle immunitaires, BTN2A2 est également pertinente pour la recherche en immunologie des tumeurs, axée sur les mécanismes d’échappement immunitaire et de dysfonction des lymphocytes T.

BTN2A2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Btn2a2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTN2A2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Btn2a2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Btn2a2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTN2A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Btn2a2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTN2A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTN2A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Btn2a2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.