Plásmido CRISPR de Activación (m) BSPII: sc-421011-ACT
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (m) BSPII es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (m) BSPII incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR BSPII (m) y el plásmido de activación CRISPR BSPII (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de Ibsp. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BSPII Anticuerpo (LFMb-25): sc-73630
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (m) BSPII | sc-421011-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen Ibsp de ratón codifica la sialoproteína ósea II (BSPII), una glucoproteína secretada de la familia SIBLING, altamente fosforilada y enriquecida en tejidos mineralizados, donde regula la organización de la matriz extracelular y la nucleación de hidroxiapatita. BSPII se une a integrinas y colágeno y se integra en programas de adhesión y migración celular que influyen en la diferenciación de osteoblastos, la actividad de osteoclastos y la remodelación ósea. La expresión de Ibsp se utiliza comúnmente como marcador de maduración osteogénica y mineralización de la matriz, y su desregulación se asocia con un desarrollo esquelético alterado y con procesos patológicos relacionados con la calcificación, relevantes para la investigación musculoesquelética y de metástasis óseas. Estas funciones sitúan a Ibsp en la intersección entre la señalización de la matriz extracelular, el depósito mineral y las vías de mecanotransducción estudiadas en biología ósea.
BSPII El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ibsp sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
BSPII El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ibsp en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ibsp, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BSPII. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ibsp y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BSPII en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BSPII en células tumorales con expresión de Ibsp silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.