Plasmide CRISPR/Cas9 KO Brn-2/BRN2/POU3F2 (h): sc-400392

Présentation

POU3F2 (Brn-2/BRN2) est un facteur de transcription à domaine POU-homeobox qui se lie à des motifs octamères afin de réguler des programmes d’expression génique contrôlant la spécification de lignage, la différenciation neuronale et le maintien de l’identité cellulaire. Dans le système nerveux, il contribue au développement cortical et aux réseaux transcriptionnels neurogéniques, tandis que, dans les lignages dérivés des crêtes neurales, il coordonne les transitions d’état de différenciation. Une activité aberrante de POU3F2 a été associée à une dérégulation des circuits transcriptionnels en oncologie, en particulier dans le mélanome, où elle s’articule avec les changements d’état induits par la voie MAPK et des programmes liés à l’invasion. En tant que régulateur nucléaire, BRN2 constitue un point d’entrée exploitable pour étudier le contrôle enhancer–promoteur, l’occupation de la chromatine et le remodelage transcriptionnel dépendant du contexte dans des cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Brn-2/BRN2/POU3F2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POU3F2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POU3F2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POU3F2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Brn-2/BRN2/POU3F2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POU3F2 pour l'étude de la signalisation de Brn-2/BRN2/POU3F2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POU3F2 essentiels à la fonction de Brn-2/BRN2/POU3F2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POU3F2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Brn-2/BRN2/POU3F2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Brn-2/BRN2/POU3F2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POU3F2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Brn-2/BRN2/POU3F2 plasmide HDR (h) et le Brn-2/BRN2/POU3F2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POU3F2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POU3F2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.