Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) Brm: sc-426415-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Brm consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Brm (m) y el plásmido de doble nickasa Brm (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Smarca2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Brm Anticuerpo (E-1): sc-17828
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Brm | sc-426415-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Brm | sc-426415-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Smarca2 de ratón codifica Brm (SMARCA2), una subunidad helicasa dependiente de ATP del complejo remodelador de cromatina SWI/SNF (BAF), que reposiciona nucleosomas para regular programas de transcripción. Brm ayuda a coordinar la accesibilidad de potenciadores (enhancers) y promotores en vías que controlan la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje, las respuestas al daño del ADN y la diferenciación. La actividad alterada de SWI/SNF, incluida la disrupción de la función de SMARCA2/BRM o de la composición del complejo, se asocia con la desregulación epigenética observada en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, como la biología del cáncer y los procesos del neurodesarrollo. Por ello, Smarca2 se estudia ampliamente por su papel en la arquitectura de la cromatina, la cooperación con factores de transcripción y la estabilidad del genoma en células de mamífero.
Brm El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Smarca2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Smarca2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Smarca2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Smarca2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.