BRD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426528

Übersicht

Brd3 kodiert BRD3, ein Mitglied der BET-Familie bromodomänenhaltiger Proteine, die acetylierte Lysine an Histonen binden, um Chromatinmarkierungen zu interpretieren und Transkriptionsprogramme zu koordinieren. Im Zellkern trägt BRD3 über Interaktionen mit acetylierter Chromatinstruktur und transkriptionellen Ko-Regulatoren zur RNA-Polymerase-II-abhängigen Genregulation, zur Enhancer-Aktivität und zur zellzyklusgekoppelten Kontrolle der Transkription bei. Diese Funktionen verorten BRD3 in epigenetischen Signalwegen, die Differenzierung, Proliferation und stressresponsive Genexpression beeinflussen. Eine fehlregulierte BET-Proteinaktivität, einschließlich BRD3-assoziierter Transkriptionsnetzwerke, wurde mit onkogenen Genexpressionszuständen und entzündlichen Signalzusammenhängen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die mechanistische Krankheitsmodellierung unterstreicht.

Das BRD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Brd3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Brd3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Brd3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BRD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Brd3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BRD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Brd3-Exone abzielen, die für die BRD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Brd3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BRD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BRD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Brd3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BRD3 HDR-Plasmid (m) und BRD3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Brd3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Brd3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.